Anticorpii monoclonali in diagnosticul si tratamentul
1 anticorpi monoclonali în diagnosticul și terapia Olovnikov NI Hematologie Centrul de Cercetare, LLC „Hematologist“ București
2 TSOLIPK Colyclons Colyclons anticorpi monoclonali DOMESTICE antigenelor eritrocitare întâi obținute la TsOLIPKe (acum Hematologie Research Center)
3 Beneficiile monoclonală Reactivi: număr nelimitat de respingere a donatorilor de imunizare specificitate de standardizare capabil să aplice teste simple de stabilitatea unui termen lung de valabilitate
if ($ this-> show_pages_images $ PAGE_NUM doc [ 'images_node_id'])
4 Determinarea donatorilor de sânge și stabilirea de fenotip fenotipizați banca de sânge se efectuează în scopul: 1. Selectarea transfuzie de sânge compatibil, în special pentru destinatarii anticorpi imun; 2. Căutare de fenotipuri eritrocitare rare și crearea unui panou pentru a determina specificitatea anticorpilor imunitar. Determinarea beneficiarilor de sânge cheltui fenotip: 1. pacienți cu anticorpi imunitar; 2. Pacienți cu antecedente de transfuzii au fost incompatibile; 3. Pacienții care au nevoie de transfuzii multiple; 4. femeile însărcinate și femeile de vârstă fertilă.
5 INVESTIGATION immunoserological DE SÂNGE (phenotyping) ABO Rh KELL ANTI - D - C - C W - c - E - e ANTI - AB - AB - A1 ANTI - K - k
6 MASA ȘI SISTEMATICĂ fenotipic SIMPLU Rovani BLOOD a devenit posibilă odată cu apariția de reactivi monoclonali ca nu a limitat la numărul de reactivi pot fi realizate simultan determinarea tuturor antigenilor pot fi selectate printr-o metodă de testare adecvată
7 DIRECTII diagnostic reactiv 1. Crearea monoclonal dintr-o varietate de sisteme de testare complexe, automatizare
8 DIRECTII reactiv diagnostic monoclonal 2.Creați reactivi oligoclonale în loc monoclonal. Eritrotest-Colyclons anti-un amestec de doi mAb care prezintă o activitate diferită față de variantele normale și slabe ale antigenului A Eritrotest-Colyclons anti-c, anti-c, anti-E este, de asemenea, un amestec de două ICA. Eritrotest-Colyclons anti-d (pentru donatori de sânge de testare): un amestec format din clasa IgG patru ICA, direcționată către diferiți epitopi ai antigenului D. Eritrotest-Colyclons anti-d super-clasă unul ICA IgM.
9 TESTAREA PROBLEMEI D u D slab (D slab) a redus expresia antigenului nu este modificat D parțială (D parțială) exprimarea diferitelor variante sunt diferite, nu există nici o serie de epitopi epitopi modificați ca tip D VI 1) D VI Hematiile pot stimula un răspuns imun (); 2) În cazul în care anticorpii anti-d în beneficiarul reacției transfuzie de eritrocite, este post-inevitabile D VI (D) Donatorii VI -! Destinatari pozitiv Rh pozitiv D VI, femeile gravide D VI-Rh negativ negativ, deoarece pot dezvolta anticorpi impotriva eritrocitelor absente determinanților transfuzia-D pozitiv.
10 VARIETATE MONOCLONAL ANTICORPI UTILIZATE ÎN TERAPIE n L Fab Fc CDR de lanț greu de H; lanțuri L ușoare; Fab Fab fragmente; Fc Fc fragmente; regiuni complementare CDR (CDRs).
Structura 11 IgG molecule de legare la antigen porțiune a părții variabile (V) partea constantă (Fc)
12 Un mecanism de citotoxicitate primar distrugere imun dependentă de anticorpi a celulelor țintă, prin acțiunea anticorpilor FcgammaR ICA Antigen anticorpi se leagă la antigen de pe suprafața celulei țintă. NK limfocitar recunoaște ICA prin intermediul receptorilor Fcgamma. NK activate de limfocite aruncă perforines și proteaze care distrug celula țintă.
boala hemolitica a fătului 13 (nou-născut) ca rezultat imunologic fat de conflict și mama, antigenul rh incompatibil rhesus după prima naștere D + fetale celule roșii din sânge, sângele prins în mama Rh negativ determina răspunsul său anti-d. Anticorpii anti-imune d aparțin clasei IgG de imunoglobuline, am sarcina Rh Rh + - care timpul sarcinii urmatoare trec prin placenta și duce la distrugerea D + eritrocite fetale, sarcina II rezultând boala hemolitica.
14 Administrarea anti-Rh imunoglobulină după naștere previne femei rezusimmunizatsiyu, și anume Acesta determină antigen specific imunosupresie I II sarcinii Sarcina
15 Efectele care cauzeaza Rh anti imunoglobulina introdusa dupa nastere: celule sanguine roșii fetale D + rapid (în decurs de o zi), dispar din circulație materne, în cazul în care medicamentul este administrat într-o cantitate suficientă (20 ug / 1 ml RBC) distrugerea hematiilor are loc fără participarea sistemului complement, și anume .E. nu au fost observate intravasculară eritrocitelor hemoliza Excreția are loc în splină, cu participarea macrofage care poartă receptori pentru fragmente Fc ale anticorpilor anti-Rh imunoglobulina determină o toleranță temporară la D + celulele roșii din sânge și previne anti-d anti-Rh anticorpi imunoglobulina nu este eficientă dacă sensibilizare a avut loc deja, chiar și atunci când anticorpi imun scăzut titrului
16 Profilaxia Capacitatea anticorpilor se leagă puternic la antigenul D și ieșire rapid D + celule roșii din circulație nu este furnizat de Rh anti imunizare anti-d proprietate mAb anti-d IG anti-d specific de legare la antigenul D pe eritrocite + Distrugere D + vitro celule roșii din sânge în reacția dependentă de anticorpi clearance-ul citotoxicitate Acceleration + D + globule rosii din sange prin splina + + circulație prelungită în sânge, o IgG de viață pe termen corespunzător + + Inhibarea răspunsului imun la antigenul D - +
17 Răspunsul imun la eritrocite sensibilizate cu anticorpi anti-d Activarea activării sistemului complement / suprimarea celulelor imunocompetente purtătoare Fcy - receptori
18 Trei tipuri de receptori activatori și un tip de receptor inhibitor exprimat pe celulele imunocompetente. Diferite tipuri de receptori mediază răspunsul în diferite tipuri de interacțiune cu porțiunea Fc a moleculei de IgG. receptori activatori: FcyRI, FcyRIIA, FcyRIII receptor Inhibând: eritrocite receptor FcyRIII FcyRllb de macrofage de limfocite B NK-limfocite-FcvRI FcyRlla FcyRNB IgG IG AH (D) activarea suprimarea activării
Schema 19 Reacția dependentă de anticorpi citotoxicitate (ALT) monocitelor NK a) b) ER anti-d FcvRI FcyRlla FcyRIII c) hemoglobina în reacție ALT distrugerii D + Er prin două tipuri de celule efectoare care poartă monocite FcyR cu FcyRI și FcyRlla, limfocitele NK cu FcyRIII .
20 Eficacitatea hemoliza mediate FcyRI și FcyRIII, în mono- și anticorpul anti-d policlonal este fundamental diferită de liză% otanti - D IG G-7 G-12 G-17 G-48 anti-d IG Fcy (I + III) FcγIII anti- d mAb care interacționează numai cu FcyRI, dar nu cu FcyRIII, nu au nici un efect imunosupresiv.
21 Utilizarea selectarea anti-d reacție ALT MCA a permis de a găsi ICA liza medierea prin FcyRIII. ICA cu această proprietate sunt foarte rare: există aproximativ 1% din totalul celor primite. G-112 G-108 anti-D, 100 ng / ml
22 antiser policlonal conține un amestec de anticorpi cu diferite proprietăți diferite clone ale celulelor plasmatice secretă anticorpi diferiți ser policlonal
23 Schema de obținere a liniilor de celule care secretă anticorpi monoclonali umani în liniile celulare ale celulelor B
24 Caracteristicile structurale și funcționale ale unei activități subclasa Liniyaprodutsent a lanțului ușor MCA MCA Sequencing Fc ALT anti-d (% din antirezus IG) G-108 κ IgG1 LBL 101 IGHG1 * 03 AA 53 n / a G-112 κ IgG1 LBL 78 IGHG1 * 03 HS 35 n / a 12 G-κ IgG1 LBL IGHG1 * 19 03 HS 26 03 IGHG1 * LBL linie limfoblastoidă umană; SG heterohibridomă uman-șoarece IGHG1 * 03 - alotip IgG 1; N / nu d făcut
25 anticorpi, astfel funcțional diferite au o secvență de aminoacizi identică. Acest lucru înseamnă că diferențele lor determină modificările post-translaționale ale moleculei de imunoglobulină. glicozilarea
26 Structura oligozaharidei atașat la Asn 297 al lanțului greu IgG uman VH CH1 CH2 CH3 Cialovaya-ta (NeuAc) Asn 297 Galactoza Mannose N-acetilglucozamină fucoză săgeată zahăr zbor poate fi omisă, ceea ce dă aproximativ 30 de variante (glicoforme) se găsesc în condiții normale IgG uman
27 Celulele umane care secretă mAb, pot fi condensate cu alte tipuri de celule și au heterohibridomă secretoare mAb uman. Secvența de aminoacizi a ICA după fuziune nu este schimbat, dar structura de zahăr din celulele hibride vor fi formate cu participarea celulelor enzimelor mielom. Murine mielom P3-X63-Ag8.653 uman / murin B-limfoblastoide celule umane Rat mielom YB2 / 0 celule celule umane / șobolan la rozătoare ICA glicozilate în mod diferit decât în celulele umane.
28 Efectul liniei producătorului asupra eficacității hemolizei mediate de FcyRIII: mouse-ul de mielom reduce și crește afinitatea de șobolan anti-d al mAb lgG1 la FcyRIII ICA ICA G-108 3F8 lgG1 anti-d oameni IG ICA G-12 persoane IG anti-d
29 Concluzie: Succesul în a face monoclonal anti-d a medicamentului pentru prevenirea bolii hemolitice a nou-născutului nu depinde numai de proprietățile ICA, dar, de asemenea, de la sistemele de celule pentru producerea de anticorpi
31 de lucru pe studiul proprietăților funcționale ale preparatelor anti-d monoclonali făcute în hematopoieză Hematologie Centrul de Cercetare de laborator fiziologie cu participarea angajaților Departamentului de pregătire a sângelui Hematologie Centrul de Cercetare, zi de spitalizare Hematologie Centrul de Cercetare, banca de sange DZ din Moscova, susținută de RFBR și OOO „hematologist“
32 reacție imună Possible la introducerea diferit glicozilate anti-d mAb uman ICA cu „alți“ receptori de zahar innascuta sistemului imunitar răspunsul inflamator, prezentarea anticorpilor AH Synthesis ICA cu zahăr „lor“, capabile să reacționeze cu interacțiunea FcyRIII cu FcyRllb pe B Interacțiunea celulelor cu FcyR de pe macrofage, splină inactivarea clone ale celulelor B antigen specifice, nici anticorpi sinteza fagocitoză neinflamatorie AH clearance cale, nici o sinteza de anticorpi