Tulpina staphylococcus hominis KLP-1 - producerea compușilor cu greutate moleculară joasă de peptide care inhibă
Tulpina Staphylococcus hominis KLP-1 izolat din probe clinice în timpul screening-ul pentru coagulazo negativ capacitatea de a produce tulpini de stafilococi cu greutate moleculară mică peptide antimicrobiene. Tulpina a fost depozitată în colecția ei GNIISKMPB. Tarasevich numerotate 284. Atunci când se cultivă în mediu lichid tulpina se caracterizează prin randament crescut de compuși cu greutate moleculară joasă de peptide antibacteriene care inhibă creșterea bacteriilor Gram-pozitive. Efectul antibacterian se manifestă împotriva bacteriilor din următoarele genuri: Arthrobacter, Bacillus, Enterococcus, Micrococcus, Mycobacterium, Rhodococcus, Staphylococcus, Streptococcus. Se obțin peptide antibacteriene cu greutate moleculară mică este 1024000 RMU în 1 L de mediu. 1 il. Tabelul 1.
Cifrele pentru patentuRumyniya2428470
Invenția se referă la domeniul biotehnologiei, microbiologie medicală și industria microbiologică, și se referă la tulpina de producție Staphylococcus hominis KLP-1, producând compuși cu greutate moleculară joasă de peptide care inhibă dezvoltarea microorganismelor Gram-pozitive.
Lichidul de cultură este detectat Staphylococcus hominis KLP-1 activitate antibacteriană, copleșitoare Staphylococcus epidermidis 33 Dezvoltarea și alte bacterii gram-pozitive. Se constată că activitatea antibacteriană se datorează prezenței a două peptide cu greutate moleculară mică, care nu necesită sinergetic se completează reciproc pentru activitate. Cu toate acestea, activitatea antibacteriană a acțiunii combinate a peptidelor crește semnificativ.
Izolarea compușilor antibacterieni este o caracteristică binecunoscută a unor tipuri de Staphylococcus spp.
In literatura de specialitate se descrie tulpini de Staphylococcus, care pot fi de interes pentru producerea biotehnologică a peptidelor antimicrobiene în scopuri comerciale.
Cunoscut tulpina S. epidermidis 5, secretând mica molecula peptidică compus Pep 5, spectrul de activitate antibacteriană, care este limitată de membrii altor specii din genul Staphylococcus și unele specii din genul Micrococcus (Sahl HG și Brandis H. Modul de acțiune al peptidei staphylococcin cum ar fi Pep5 și condițiile de cultură care efectuează activitatea sa. Zentralbl. Bacteriol. Mikrobiol. Hyg. 1982. V.252, № 2. P.166-175).
Astfel, aceste tulpini cunoscute au un spectru relativ îngust de acțiune antimicrobiană.
Problema care trebuie rezolvată prin invenția revendicată este de a furniza o nouă tulpină de microorganisme-producători de compuși peptidici foarte active cu greutate moleculară scăzută cu spectru larg de acțiune antibacteriană.
Rezultatul tehnic care poate fi obținut prin practica invenției este un randament crescut de compus din titlu foarte activ cu spectru larg de activitate antibacteriana când cultivarea producând un mediu bogat.
REZUMATUL INVENȚIEI - tulpina Staphylococcus hominis KLP-1 secretor când cantități de compuși cu greutate moleculară joasă peptidici antibacteriene care inhibă creșterea microorganismelor Gram-pozitive din diferite genuri și familii cultivate într-un mediu nutritiv lichid a crescut.
Tulpina a fost depozitată în colecția Institutului de Cercetare de Stat de standardizare și controlul preparate medicale biologice. L.A.Tarasevicha sub numărul 284 ca o peptide antimicrobiene cu greutate moleculară mică care produc un spectru larg de acțiune, diferite de tulpini cunoscute semnificativ niveluri mai ridicate de producție a acestor compuși într-un lot de cultură.
Creștere pe mediu agar.
Când însămânțare cu accident vascular cerebral înclinat cresc sub forma circulară, cu muchii netede netede colonii albe laptoase a căror dimensiune în condiții aerobe, la 37 ° C, după 24 de ore este de 1,2-1,5 mm, după 48 ore de 1,7-1, 9 mm și 72 mm 2,0-2,2 h. Coloniile pot fi ușor îndepărtate de pe suprafața buclei microbiologice agar.
Creștere în mediu lichid.
Când inocularea un mediu de cultură lichid în condiții de agitare au cunoscut o creștere rapidă, sub forma unei suspensii omogene, care în repaus celulele bacteriene se stabilească în mod uniform pe fundul vasului și se mișcă ușor resuspendat cu agitare. Densitatea optică a unei culturi peste noapte lichid omogen cultivate în flacoane de 250 ml cu 50 ml de mediu la 37 ° C într-un agitator Certomat termostatată ( «Sartorius», Germania) la 150 rotații / minut ajunge la 2,7-3,2 (detector - PD-303 spectrofotometru, 600 nm lungime de undă, o cuvă cu o lungime de cale optică de 10 mm). La toate mass-media, în prezența a 10-15% NaCl observate o creștere rapidă.
Celulele au fost lizate rapid sub influența lysostaphin, dar insensibil la acțiunea lisozimă.
Oksidazootritsatelny. Formarea de acid în oxidarea aerobioză zaharoză, maltoză, trehaloză, lactoză, galactoză și fructoză.
Nitratreductazei nu au forma acetoină, nu provoacă hemoliză și nu este ser de iepure coagulat; Ei nu au o fosfataza alcalină, sensibilă la novobiocină.
Produsul este sintetizat printr-o tulpină de:
Efectul antibacterian al supernatantului culturii Staphylococcus hominis KLP-1 manifestă atunci când face într-un mediu de creștere bacteriană S. epidermidis 33. Activitatea inhibitorie păstrate după 60 min Supernatanți de fierbere. Tratamentul supernatanților nucleazei - ADN-ază ARN-azei nici un efect asupra efectului antibacterian. După proteoliză cu tripsină, pepsină și proteinaza K activitate antibacteriană în supernatantele culturii de producător dispare complet. Când ultrafiltrare în Centricon 3 sistem (3 kDa, «Amicon») Activitatea antibacteriană a preparatelor pe deplin detectate în ultrafiltrat. Faptele confirmă natura peptidică a factorului având o greutate moleculară mai mică de 3000 Da.
O metodă de determinare a activității antibiotice în supernatantele de cultură Staphylococcus hominis KLP-1:
Determinarea activității antibacteriene în alicote de mediu de cultură au fost realizate în plăci imunologice folosind principiul diluții ale alicote de medii de creștere. Adânciturile plăcii au fost adăugate 100 L de MN mediu lichid. In primul godeu în rândul 100 ui testului supernatantul, sterilizat prin fierbere în baie de apă timp de 10 minute. Prin transferul secvențial 100 l a conținutului primelor sonde de rând în următorii diluții seriale de două ori au fost preparate de la 1: 2 la 1: 4096. Apoi, fiecare godeu s-a adăugat 10 ui dintr-o suspensie de test de cultură a celulelor S. epidermidis 33 cuprinde 10 CFU luna iunie / ml. Eficacitatea a fost evaluată prin acțiunea de inhibare a 16-18 ore de incubare a plăcilor la 37 ° C Pentru unitate convențională factor activitate antibacteriană luând reciproca diluției maximă la care nu a existat o inhibare completă a creșterii bacteriilor de testare și sunt exprimate în termenii activității sale (EA) / ml.
Condițiile de proces și compoziția mediilor de stocare a tulpinii: In MN tulpina de laborator stocate pe agar înclinat după însămânțare inocul lichid buclă. Însămânțări în agar MH proaspăt se efectuează la fiecare 3 luni.
Pentru celulele liofilizate ale tulpinii în agar gelatină zaharoză este utilizat ca un crioprotector care conține 10% zaharoză, 1,5% gelatină și 0,1% agar. Investigarea producerii peptidei antibacteriană după tulpina liofilizarea a arătat retenție completă a acestei caracteristici atunci când este crescută pe mediu lichid.
fagi de băut: bacterii din sensibilitatea tulpinii la fagi a fost investigată în ramura Federală de Stat Unitar Enterprise „Microgen“ NPO „Biomed“ (Perm). Tulpina S. hominis KLP-1 lizat fagi tipic I, II, III, V și grupări vnegruppovymi bacteriofagilor, precum bacteriofag specific la un titru de 10 -3 metoda Gracia.
caracteristici genetice: tulpina antibiotikochuvstvitelnosti studiat metoda convențională folosind disc standard, conținând mecanism diferit de antibiotice de acțiune. Contabilizarea inhibarea zonelor de creștere bacteriană de gazon a fost realizată după 18 ore.
Diametrul mediu al zonei de inhibiție în mm:
Ampicilină - 15; oxacilina - 18; Gentamicină - 9; cloramfenicol - 10; lincomicină - 32; rifampicină - 36; tetraciclină - 16; fuzidin - 28; eritromicină - 10; cefalexin - 23; ciprofloxacina - 26; Vancomicină - 18.
Posibilitatea utilizării conform invenției este ilustrat prin exemple, care nu limitează scopul și spiritul revendicărilor legate de aceasta.
acțiune antibacteriană a supernatantii mediului de cultură Staphylococcus hominis KLP-1 este prezentat în Tabelul 1.
Astfel, tulpina de producători care rezultă este un compus cu greutate moleculară joasă de peptide care prezintă activitate antibacteriană împotriva unui spectru larg de microorganisme gram-pozitive. Tulpina se caracterizează printr-un nivel ridicat al producției acestor compuși atingând 1024000 RMU în 1 litru de mediu când sunt cultivate într-un mediu nutritiv lichid.
PRETENȚII
Tulpina de Staphylococcus hominis KLP-1, depozitată în colecția ei GNIISKMPB. Tarasevich numerotate 284, - care produc compuși cu greutate moleculară joasă peptidici care inhibă dezvoltarea bacteriilor Gram-pozitive.
PatentyRumyniyav C12P21 / 00 clasă:
