Serodiagnosis și diagnostic retrospectiv, pe termen liber documente, eseuri și disertații
Criteriul pentru a judeca cu privire la persistența virusului virulent în turmă este Xia titruri de anticorpi în serul sângelui păsărilor. Studiul a fost realizat doar cu seruri obținute din Paired aceeași pasăre. Prima probă este luată înainte de vaccinare (sau la începutul bolii), a doua - cu 15-20-a zi, următoarea dată pe lună. HAI Aplicată, TTL, ELISA.
Diagnosticul diferențial. NB ar trebui să fie diferențiate de la UPS, gripa, PMA-2, ILT, micoplasmoză și colibaciloză păsări. Pentru diagnosticul de laborator al gripei aviare, IB și NB utilizând producția de instrumente de diagnosticare biofabrichnogo. Diferentierea virusurilor gripale A, există 14 subtipuri, iar paramixovirusuri, inclusiv 9 serotipuri, este posibilă numai în laborator.
Diagnosticul de laborator al pestei porcine clasice
porcine clasice ...
febra (LCR) - boală infecțioasă foarte contagioasă caracterizată prin febră, leziuni ale sistemelor formatoare de sânge din sânge și, pneumonia lobară si inflamatia lobară-pseudomem a intestinului gros. Grupa A a datelor OIE.
Pentru CSFV sensibile porcii domestici din toate rasele și vârstele, în special rasă pură și mistreți.
Boala este înregistrată în principal în Asia, America Centrală și de Sud, precum și în unele părți ale Europei și Africa.
Virusul febrei porcine face parte din familia Flaviviridae, genul pestivirus. natură virală CSF stabilită în 1908 Schweinitz și Dorsey.
variabilitate antigenică a CSFV nu a fost dovedită. Virulența distinge A-, B- și virusul C -Option. Grupa A este format din tulpini virulente epizootice, cauzând porcii de toate vârstele scurgeri grav boala. virusurile subgrupului B virulente numai pentru porci și în timp ce circulă în turmă cauzează ciuma atipice sau cronice.
PodgruppaS - piese slabovirulentny americane. 331.
Acesta a stabilit o relație unilaterală între virusul CSFV și bovine diaree: anticorpi la virusul diareei bovine neutralizeze CSFV, dar anticorpii la CSFV nu neutraliza virusul diareei. Porcii ser convalescente poate descoperi BHA, PA și KSA.
Diagnosticul se bazeaza pe date epizootică, simptomele bolii, precum și modificările patologice ale rezultatelor de laborator. Epizootologicheskie și date patologice depinde de susceptibilitatea porcilor, virulența tulpinii și complexul de măsuri de prevenire a LCR.
În cazul în care izbucnirea tulpina virusului este virulent, numărul de porci nu sunt imune, boala este foarte contagioasă mortalitate, ridicată, hipertermie, leziuni cutanate hemoragice, semne ale sindromului șocului și organele sistemului nervos central. Să acorde o atenție pronunțată diateză hemoragică în diferite organe, ganglionii limfatici marmorat, infarcte splenice, hemoragii în rinichi pe un fond de anemie, gastroenterita-catarală hemoragic, encefalomielita limfocitară. Cu toate acestea, vaccinarea frecventă a porcilor împotriva porcine creează un fond imunitar care influențează simptomele bolii și natura modificărilor patologice. In timpul cronic măsurabilă caracteristic niyami sunt placa diphtheritic focale (muguri), eczeme maro, pleurită fibrinoasă și pericardita, amigdale de necroză. Boala cronică apare adesea pe fundalul altor infecții. Diagnosticul corect se poate face numai prin teste de laborator.
metode rapide pentru detectarea virusului CSF. Recomandat pentru diferențierea pestivirusurilor folosind o sondă de ADN pentru CSFV. Ca o probă de hibridizare folosind ADN complementar (32 P marcat) proteină la o porțiune a genei P125 homopolar. Pentru detectarea rapidă a CSFV-D în țesuturi prin PCR din probele de țesut animal de casă izolat fenolice Preparatele de ARN a fost transcris invers și amplificat prin PCR. Utilizați „imbricate“ primeri permit amplificarea diferitelor CSFV izolate. PCR are o sensibilitate și specificitate ridicată și permite să se diferențieze diferite pestivirusuri. PCR varianta propusă pentru detectarea CSFV folosind 4 primeri pentru amplificarea fragmentelor de gene ale proteinei
E-1. Sensibilitatea metodei este de 10 TCD50.
Izolarea virusului. Pentru izolarea virusului, probele de sânge, bucăți de splină, amigdale, ganglioni limfatici, oase piept, rinichi si plamani de la 2-3 animale în timpul primelor 2 ore după moartea sau sacrificarea pacienților în stare de atonalitate. Materialul este preluat în fiole sterile, închise cu dopuri de cauciuc, flacoane tratate la exterior cu 5% cloramina p-rom sau limpezit cu 20% înălbitor p-rom, învelite cu tifon îmbibat cu dezinfectant p-set, și plasat într-o pungă de plastic. Luat patmaterial plasat într-un termos cu gheață, sigilate și trimise prin curier la laborator cu documentul de însoțire. In laborator fiecare probă a fost preparată dintr-o suspensie 20% în 0,85% soluție de p-pe NaCl, care de trei ori congelate și decongelate, centrifugate 3-4 mii. 20-30 min-1 min. Supernatantul a fost tratat cu antibiotice 1 oră la 37 ° C și utilizat pentru izolarea virusului.
Izolarea virusului în culturi celulare. Utilizați o cultură continuă a PK-15 celule crescute pe plăci de sticlă. Pentru fiecare material eșantion luând cel puțin 8 tuburi în care se pipetează
0,4 ml de material de testat. Virusul este adsorbit timp de 2 ore 137 ° C, apoi a fost îndepărtat, celulele au fost spălate și mediul se toarnă 2 ml de mediu proaspăt conținând ser de vițel 2%. Celula de control al calității culturii este lăsat neîncărcat 10 tuburi. Incubeaza 24-96 ore. Cultura CSFV in RK-15 celule nu provoacă, prin urmare, afișajul este realizată prin IF directă. După 24-96 h după inoculare, plăcile cu un monostrat de celule eliminate din tuburi, uscate în aer și fixe 10 min în rece acetonă (4 ° C), se usucă în aer și le-a pus pe o picătură de celule cu FITC-lg CSFV aplicată diluția de lucru pe lamele de sticlă. Formulările păstrate într-o cameră umedă timp de 30 min la 37 ° C, apoi se spală într-un recipient cu FSB 0,01 M la pH 7.2-7.5 timp de 30-40 minute la întuneric, se clătește cu apă distilată, se usucă în aer și încorporat în glicerol tamponat (9 părți glicerină și 1 parte 0,01M FSB, pH 7,5). În acest scop, glet glisant aplicat minuțioase celule de droguri glicerol tamponat lu sunt plasate în jos și se toarnă topitura de margine Privitori lennym parafina sub microscop fluorescent.
La preparatele infectate tratate cu Ig-FITC, virusul AG este detectat de verdele strălucitor al strălucirea difuză a citoplasmei celulelor afectate, aranjate în grupuri, care sunt numite mikroblyashkami fluorescente. După 24-48 ore, în celulele de cult D-RC-15 a fost observat aparitia mikroblyashek. În absența acestora, în primul pasaj este realizat 2 și trecerea a 3-a materialului de test urmat IF 24-96 ore.
Afișaj și cercetare virusa.Gistologicheskie de identificare. Este efectuat pentru a detecta țesuturi specifice-Neny neuronale măsurabile. De la porcii morți sau sacrificate, să ia bucăți de emisfere cerebrale, cerebel, Amon, coarnele ale măduvei spinării, în diferite zone. Preparatele histologice au fost colorate cu hematoxilină-eozină. In majoritatea cazurilor (70-93%) în SNC a fost observat și encefalomielita nesupurative ob limfocitare, caracterizată prin infiltrare limfocitară perivascular, proliferarea focală a celulelor microgliale (noduli gliale) și celule distrofie gangliozngh. felii B preparate din lim-fouzlov, mușchiului cardiac și hepatic, poate detecta prezența celulelor acidofile incluziuni vnut-riyadernyh, oarecum mai mică decât nucleoli. În nodul limfatic acestea sunt pentru 6-12 zile de la infectare.
CSFV are un gematotropizmom pronunțat cu privire la măduva osoasă care conține numărul de conductoare mai mare de celule blastice decât ganglionii limfatici și splina. Prin urmare, măduva osoasă este afectat în primul rând; Celulele myelopoietic și eritropoietice inhibat proliferează și celule mari, cu citoplasmă bazofile. În același timp, găsi o imagine a corpurilor lymphopoietic adanci si distrofie citoliza.
Dacă suspectați o plagă pentru diagnostic mai grav animalele bolnave sunt sacrificate și examinate frotiuri din măduva osoasă a pieptului.
Biotestare. De gestionarea cu succes a bolilor infecțioase sunt luați purcei cu vârsta de 2-3 luni, cu o greutate de 20-30 kg. Deoarece materialul este de 10% suspensie preparată din organe (splină, ganglioni limfatici, măduva osoasă) sau sânge de la animalele moarte. Suspensia a fost tratată cu antibiotice, se menține timp de cel puțin 4 ore la temperatura de 4 ° C, centrifugat și supernatantul a fost utilizat pentru a infecta animalele. Trei rosyatam se administrează subcutanat 1 ml de sânge sau 2 ml de organe de suspensie. Două animale au fost inoculate cu materialul de testat nu le conține separat pentru control. Două porc acolo imun la CSFV, se administrează materialul de testat la aceleași doze cu diagnosticul diferențial obiectiv-Hoc împotriva pestei porcine africane. Căci au fost observate toate animalele timp de 21 zile și Arici zi măsoară temperatura corpului.
Diagnosticul este considerat pozitiv dacă 2 din 3 purcei bolnavi neimuni, pro-manifestând simptome ale bolii, și mor, în timp ce 2 au ramas sanatosi sau imun minor prezintă și pe termen scurt (1-4 zile), semne de intensitate slabă a bolii (febră care să nu depășească 41 ° C). Cu toate acestea, trebuie înțeles faptul că, în absența reacției la animale-la imputarea sensibile sau în cazul severitate insuficientă nu poate fi exclusă cu certitudine prezența virusului în materialul de testat. Negativ rezultat-TION infecției se poate datora unei cantități prea mici de un virus sau o virulenta slabă a acestuia din urmă. Prin urmare, pasul următor este de a repeta, după 3-6 săptămâni după inocularea materialului de testat, infecție (reinfectare) cobailor, de data aceasta cu un virus cunoscut cunoscut virulență. Absența-Corolar animalele de reacție la această contaminare indică achiziționarea Immuno-theta, ca urmare a primei inoculare (perebolevaniya asimptomatice) și indirect indică prezența virusului în materialul de testat. Concomitent cu al doilea eșantion inoculat cu doi porci susceptibili suplimentare (de control) viruși care utilizează-băi pentru reinfectare.
Uneori, proba biologică nu este justificată sau să dea rezultate vagi atunci când divizia a tulpinilor de virus care cauzeaza boala usoara. Aceste tulpini au inoculat porci provoca boli cronice. Problema este complicată de faptul că tulpinile virulente cu slabe nu pot avea proprietăți de imunizare, dar nu dorește să creeze diagnostic precis prin OAPC utilizând o tulpină Viru-valenta provocare suplimentară (reinfectare). In diagnosticul bolilor cauzate de aceste tulpini pot avea nevoie de animale tinere, și pasaje suplimentare pentru a spori virulenta.
Evaluarea scara propusă de virulență a tulpinilor de câmp a CSFV:
- slabovirulentnye (patogenă numai pentru purceii sugari) nu tulpinile de imunizare. Purceii sugari bolnav în primele zile de viață și de moarte a marilor lor purceilor înțărcați (12-15 kg) reacționează numai în anumite zile ale creșterii temperaturii corpului, nu achiziționează imunitate;
- slabovirulentnye (patogen pentru animalele tinere) tulpini de imunizare. Animalele cântărind 15-20 kg dezvoltă o boală cronică, scrofite cântărind 35 kg creștere pară ruyut temperaturii corpului, care a durat timp de câteva zile. La deschiderea detectăm viață hemoragiile mici petesiale. Animalele dobândesc imunitate;
- extrem de tulpini virulente determina animale cu o greutate de 30 kg de boală acută, rata de mortalitate de 40% sau mai mult. La modificări hemoragice caracteristice de autopsie.
modulare de testare a activității fagocitare a macrofagelor. Funcția Deficienta fagocitară conduce la perturbarea reacțiilor imune locale cu dezvoltarea proceselor inflamatorii-TION pe membranele mucoase. Când CSF are loc localizarea funcțiilor leucocitelor fagocitare în reproducerea unităților de vaccin. LK-VNIVViM redus procentul și indicele fagocitară de neutrofile și macrofage, și în reproducerea PC virus virulent. Chi-Myn creșteri procentuale și a indicelui fagocitozei neutrofilelor și reduse care macrofagelor. Când CSF in vivo și in activitatea fagocitară vitro a leucocitelor din sânge scurt timp (până la 4 zile) scade în timpul infecției și tulpina de vaccin creste in macrofage prin infecție cu o tulpină virulentă de CSFV. Montat în infitsi celule Rowan-tinta efectul citopatic exprimat în activitatea de modulare a fagocitelor CSF de macrofage tare Cu porcin utilizate în diagnostic.