Proprietățile culturale ale microbilor
Caracteristici culturale ale microbilor determinate de natura creșterii lor pe medii nutritive. Fiind o constantă pentru fiecare tip de microb, ele sunt un element important de diagnostic.
Creșterea microbilor pe mediu solid.
Pentru a studia proprietățile coloniilor de microbi sunt cultivate pe un mediu nutritiv solid în vase Petri. Când materialul de însămânțare încearcă să obțină o creștere colonie izolată. Cupe cu semănatul prima vizionare cu ochiul liber sau printr-o lupă, iar apoi le-a pus pe scena microscop cu susul în jos și navigarea colonii în lumina transmisă cu o lentilă și cu o creștere mică în deschiderea conică. Coloniile caracterizat prin dimensiune, forma, contur margine topografie, suprafata, culoarea, structura și consistența.
Dimensiunea Colony determinată de diametrul său. În funcție de diametrul distinge colonii punctul (diametru mai mic de 1 mm), mici (1-2 mm diametru), medie (2-4 mm diametru) și mare (diametru de 4-6 mm sau mai mult).
Colony este forma potrivita - rotund, greșit - amoeboid, rizoidnaya - conica, care amintește de rădăcinile împletite de copaci (Figura 28).
margine de contur caractere determina atunci când se analizează colonie sub lupă sau microscop mărire mică. Distinge margini netede sub forma unor linii clar definite și inegale (Figura 29). Ultimul este împărțit în:
crestată margine, constând dintr-o mare, dinți ușor rotunjite sau aplatizate forma corecta;
margine ondulată, care este ușor diferită de faptul că dinții dantelate mari, se sunt neclare;
erodate sau regiune zigzaguri constând din dinți ascuțite de diferite dimensiuni și forme;
Regiunea fimbriată având un vilozităților blând.
În unele cazuri, o linie clar definită separă colonia de pe suprafața mediului este absent. Această margine a coloniei este numit vag.
Relief (profil) se caracterizează prin ridicarea coloniilor sale pe suprafața mediului de cultură și o formă de contur în secțiune verticală (Figura 30). Determinat de ușurare a coloniei cu ochiul liber sau cu o lupă atunci când este privit de sus și din lateral.
Disting: 1) picătură în formă de colonii și cupole cu forma circulară corectă pronunțat grad diferit de convexitate care, în secțiune verticală este un segment al unei sfere de rază și diferă numai în lungime. Coloniile sunt ușor convexe rază lungime mai mare; cupola - mai puțin;
2) Colony superioară plat plano sau margini abrupte; au o formă în secțiune verticală a unui trapez;
3) con de colonii având o formă în secțiune verticală a unui triunghi:
4) Coloniile cu un niplu ridicat și rola de mijloc circumferențial;
5) colonii cu centrul deprimat;
6) plat colonie, suprafața mediului târâtor.
Fig. 28. Forma coloniilor: a - rotund; b - rotund cu margine crestată;
într - o rundă cu rola de margine; g; etc - rizoidnaya; e - o rizoidnym margine;
Ei bine -amebovidnaya; s - filamentos; și - ori; a - greșit;
l - concentric; m - complex
Fig. 29. Margine de colonie: a - neted; b - ondulat; în - unelte;
r - rotor; etc - greșit; e - ciliata;
Ei bine - catenar; s - vilozitar; și - ramificat
Studiul de suprafață a coloniei cu o lupă sau un microscop la o mărire redusă. Suprafața coloniei este mată sau lucioasă lucioasă, uscată sau umedă, netedă sau rugoasă. Colony Smooth notate cu litera S (neted), scabrous - litera R (brută), ceea ce înseamnă, respectiv, "netede" și "curajos". Mecanismul de formare a formelor netede și aspre ale coloniilor din cauza procesului diferență de diviziune celulară. Celulele microbiene în colonii S-formă aranjate în contact cu suprafețele lor laterale, celulele sunt R-forme, păstrând în același timp de fisiune poduri citoplasmice, lanțuri de formă, care sunt suprapuse unul pe celălalt, determină o suprafață aspră și o margine inegală a coloniei.
Fig. 30. Profilul coloniilor: a - un îndoit; b - crateriform;
în - Lumpy; r - încarnat în agar-agar; d - plat; adică convexe;
Ei bine - lacrima; s - conic
Culoarea coloniei este determinată de pigment, care produce o cultură de microbi. Marea majoritate a pigment bacterii patogene nu formează, astfel încât coloniile lor sunt de culoare turbiditate incolore sau lăptoasă, similar cu opal. În lumina transmisă, aceste colonii într-o măsură mai mare sau mai mică măsură transparentă. specii microbiene cromogenice produc colonii de diferite culori: crem, galben, portocaliu, auriu, albastru, rosu, violet, negru și altele.
colonii de structură determinate la microscop cu lumină transmisă la o mărire redusă, diafragma conică sau condensator la puțin coborâtă. În colonii pigmentate și colonii, nu transmite lumina, aceasta nu este definită.
Prin natura structurii următoarelor tipuri de coloane:
1) hialin - incolor, transparent, fără structură bine definită vizibilă;
2) granular, care, în funcție de mărimea granulelor fin divizate în - și coarsegrained;
3) mustăți sau fibre, caracterizate prin prezența unor fire lungi, dens întrețesere în colonie mai groase.
Coloniile sunt omogene și eterogene. Structura primului mod egal în toate părțile, a doua porțiune centrală este diferită de sectoarele periferice sau individuale au o structură diferită de masa de repaus.
Consistența coloniei este determinată de starea fizică a fost examinată prin atingerea sau scoaterea partea ei din materialul buclei bacteriene. Prin natura consistenței coloniilor sunt:
1) Pasta-like, ușor detașabile și estompează pe suprafața unui mediu nutritiv, cum ar fi untul;
2) aderentă vâscos sau la nivelul mucoaselor și extinzându-se pe bucla;
3) fibroase sau tare, dens, îndepărtat de pe suprafața mediului nutritiv sub forma unui film elastic care corespunde mărimii și formează colonii;
4) casant, uscat, sfărâmare la bucla atingere.
Caracteristicile de creștere microbiană în mass-media lichid.
Lichid natura mediu nutritiv de creștere microbiană este mai diversă decât pe un mediu nutritiv solid. Cu toate acestea, aici am identificat următoarele forme de creștere a bacteriilor.
1. mediu de creștere bacteriană cu turbiditate uniformă. a cărei culoare rămâne neschimbată sau modificată în conformitate cu culoarea pigment solubil în apă produse într-o cultură a microbului. O astfel de caracteristică de creștere a multor bacterii patogene care aparțin grupului anaerobilor facultativi.
2. Creșterea bacteriană inferioară caracterizată prin formarea de sedimente pe fundul tubului cu un mediu nutritiv lichid. Precipitatul poate fi kroshkovidnym rare sau abundente omogene flocoane, fibroase sau sub formă de pulbere mari, consistență vâscoasă, mucoase, casant sau păstoase. Mediul deasupra precipitatului poate fi transparent sau turbiditate. Culoarea precipitatului și mediul localizat deasupra acestora, determinată de prezența pigmentului produs prin cultura de microbi. În cazul în care pigmentul nu formează o cultură, mediul nu își schimbă culoarea și dobândește un precipitat, de obicei, o culoare galben alb sau gri. Înălțimea de jos este specifică tipului de bacterii cu respirația anaerobă.
3. creșterea bacteriană parietal se exprimă în faptul că mediul nutritiv din tubul de testare este complet transparent. Bacteriile cresc, formând un fulg mai mult sau mai puțin mari friabil sau, invers, granule compacte atașate la suprafața interioară a peretelui vasului, cu care, în funcție de tipul de bacterii sunt îndepărtate cu ușurință sau cu dificultate.
4. Creșterea în suprafață a bacteriilor este caracterizată prin apariția pe suprafața filmului a unui mediu nutritiv lichid, aspectul și natura, care poate varia:
a) peliculă subțire este moale, incolor, are o formă de placă abia perceptibil dispare când scuturarea tuburile și agitarea mediului;
b) filmul este umed, gros, în mod clar vizibile cu ochiul liber, o consistență vâscoasă, mucos, aderă la bucla și ajunge pentru ea;
c) de film dens, aspectul uscat seamănă cu bucăți de piele și atunci când încearcă să captureze materialul scos din ea în întregime sub forma unui disc circular care corespunde diametrului tubului:
g) peliculă densă, uscată, cu cutate și, uneori, suprafața Warty margini atașate la pereții vasului; sub agitare o buclă bacteriană lichid sau atinge este rupt în bucăți, se scufunda mai adânc în lichid.
culoare filmului ca mediu de cultură depinde de pigment produs de cultura tot mai mare de microbi. Creșterea bacteriilor sub forma unei caracteristici de suprafață a microbi film aerofilov.
Creșterea în semi-mediu.
Pentru a identifica caracteristicile de creștere microbiană pe un mediu de cultură nutritiv semisolid în studiu este inoculată într-o coloană de 0,2-0,5% agar semilichid. Pentru caracteristicile de creștere au fost manifestat cel mai clar, de protecție puncție face aproape de peretele tubului. Seedul produs în acest mod face posibilă identificarea germenilor de rasă în mișcare și să le diferențieze de alambic.
microbii mobili din coloana marcată semilichidă agar cauza opacifiere, ce se extinde mai mult sau mai puțin uniform pe toată grosimea mediului.
Microbii mucegai fix cresc doar în timpul puncția mediului, amintind cilindrică turturi sau formă conică. În acest caz, mediul este complet transparent.
Proprietățile biochimice ale bacteriilor
Prin caracteristicile biochimice ale bacteriilor testate la oxigen, activitatea enzimatică, abilitatea de a cliva anumiți carbohidrați, produși metabolici se acumulează.
Atitudinea de oxigen din aer. Referitor la oxigenul din aer împărțit de microorganismele sunt aerobi microaerophiles, anaerobi obligatorii ai și facultativ anaerobi stabilesc standarde. Pe relația bacteriilor la oxigen este judecat de creșterea culturii prin placarea o injecție într-o coloană cu agar nutritiv. Aerobic dezvolta în partea superioară a injecției, anaerobii - în partea de jos și anaerobii facultativi - uniform pe toată durata injectării.
Printre proprietățile biochimice ale culturii cea mai importantă determinarea activității lor enzimatice.
Folosind uglevodovi alcooli culturi de microorganisme este determinat prin însămânțarea 0.1-0.2 cm celule de testare 3 în suspensie în tuburi cu mediu lichid sau semilichidă care conțin carbohidrați și indicator. Pentru detectarea formării de gaze în scindarea carbohidraților în mediul lichid este coborât plutește. Un set de medii cu carbohidrați și un indicator numit „culoarea“ de lângă Hiss. Nume gama „culoare“, datorită faptului că sub acțiunea unor enzime scindați celule de zahar cu acumularea de acid sau alcalin, schimbând astfel culoarea indicatorului și mediul, alte zaharuri nu sunt clivate, iar culoarea mediului nu este schimbat. Hiss număr scurt cuprinde un mediu cu glucoză, lactoză, zaharoză, maltoză și manitol. Linia lung este mediu cu arabinoza, xiloza, ramnoza, galactoza și alții introdus suplimentar. Polizaharidele (inulină, amidon, dextrină), alcooli (glicerol, dulcitol, inozitol).
Tuburile inoculate au fost plasate într-un termostat la temperatura optimă. Au fost citite la 2-4 zile (pentru microorganisme cu creștere lentă în 7-10 zile). Observați schimbarea de culoare a indicatorului schimbările din mediu sau lipsa de culoare, iar aspectul sau absența gazului în flotorului.
Pe baza acestor date încheie orice zahăr asimilează studiat cultura bacteriană.
Activitatea proteolitică. Microorganismele având activitate proteolitică, lichefieze gelatina, peptonizing lapte. Pentru a determina această cultură caracteristică bacterii testate prick inoculată în tuburi cu gelatină și cultivate timp de 4-10 zile. la temperatura camerei, observând viteza și natura subțierea: stratificat, în formă de pâlnie, vezicular, etc. (Fig. 31).
Fig.31. Opțiuni muia gelatina
Activitatea catalazei. Forma enzima catalaza multe microorganisme aerobe. Pentru a efectua picătură studiu de soluție de peroxid de hidrogen 10%, se aplică pe o colonie de microorganisme de 24 de ore, crescute pe mediu solid într-un vas Petri. Izolarea sub formă de bule de gaz de oxigen indică prezența bacteriilor în celulele catalazei.
Natura creșterii în lapte. Lapte degresat diluat cu apă într-un raport de 4: 1, indicator adăugat bromcrezol purpuriu (2 cm3 de 1,6% soluție de alcool tărie per 1 dm 3 lapte) sau turnesol (10 cm 3 soluție 4% în 1 dm 3 lapte) distribuită în flacoane de 8-10 cm 3 și sterilizate într-o autoclavă la 0,05 MPa, timp de 20 de minute. Eprubete cu lapte inoculat cu bacterii cultura studiată și cultura 6-14 zile. la o temperatură optimă. Formarea acizilor în scindarea microorganismelor lactoză marcați printr-un indicator de schimbare a culorii. Dacă acidul se acumulează într-o cantitate considerabilă, apoi cheagul format. Bacteriile cu proteaze active, scindeze cazeina, cauzând lapte peptonizarea.
Formarea de indol. Unele microorganisme sunt capabile să scindeze aminoacidul triptofan pentru a forma indol, care este, de asemenea, o caracteristică de diagnostic pentru a determina tipul de bacterie. Pentru a determina indolul utilizat metoda Morel. Tuburi din 8-10 cm3 dintr-un bulion de carne-peptonă steril suplimentat cu 0,01% triptofan (sau fara) bacterii inoculate studiu cultura. Sub dop din bumbac de armare fâșie de hârtie de filtru impregnată cu acid oxalic. Tuburile au fost incubate la temperatura optimă timp de 24 h. Formarea porțiunii inferioare indol a benzii este colorată în roz.
formarea de amoniac. substanțe proteice Amonificare de enzimele microorganismelor este însoțită de eliberarea de amoniac. Această capacitate a bacteriilor de a investigat prin inocularea stabilesc o cultură în tuburi cu bulion de carne-peptonă, care au fost incubate într-un incubator la 37 ° C timp de 2-3 zile. Formarea amoniacului este stabilită printr-o modificare a culorii de benzi de hârtie de turnesol armat între dop și tubul de gât, astfel încât banda să nu atingă mediul de cultură. Emisia de amoniac este determinat de schimbarea culorii de hârtie de turnesol de la roșu la albastru.
formarea de hidrogen sulfurat. La microorganisme clivaj conținând sulf aminoacizi (cisteină, metionină) este produs hidrogen sulfurat. Pentru a determina formarea tubului de hidrogen sulfurat este inoculat cu o cultură în bulion de carne peptonă de bacterii și examinate sub dopul de ranforsare a benzii de hârtie de filtru impregnată cu o soluție de acetat de plumb. Tuburile inoculate au fost plasate într-un incubator la temperatura optimă timp de 7-10 zile. benzi de hidrogen sulfurat fixate prin înnegrire datorită formării de sulfură de plumb.