Difterie - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

Pagina 52 din 91

Mai întâi difteria bacillus Corynebacterium diphtheriae) a fost descrisă de E. Klebs în 1883 și F. Leffler - 1884
Morfologia și proprietățile tinctoriale. Bacteriile diferă polimorfism pronunțată. De obicei, ei au o lungime de 3-4 microni și 0,3-0,5 microni în grosime (fig. 83 și 84).

Fig. 84. Frotiul filmului difterie. Acoperirea albastru de metilen (procedeu într-o etapă).
Fig. 83. diphtheritic cultură rod Pictură de Neisseria.

Există, totuși, unele sunt mai lungi, unele forme mai scurte. Morfologic împotriva bețișoare difterie caracterizat prin aceea că ele conțin incluziuni citoplasmatice granulare, și la unul sau ambele capete ale celulelor sunt îngroșări în formă de balon, care le dă formă ghioaga (sogupa - nucșoară). De aici numele de Corynebacterium diphtheriae. Flo raport cu fiecare alte stick-uri sunt plasate la un unghi drept sau ascuțit, ca de multe ori degetele întinse.
Difterie bacil Gram-pozitive și bine pictate toate coloranții de anilină, dar percepe culoare inegal care. Depinde de cereale conținute în acesta volutin (Babes-Ernst). Acestea din urmă au o formă rotundă sau ovală în formă și sunt de obicei situate la capetele bețișoare. Volyutinovye cereale percep culoare mult mai intens restul citoplasmei, ceea ce le face ușor de a găsi și de a folosi tehnici simple de colorare. In practica de laborator în acest scop sunt metilen agenți coloranți albastru, sau prin metoda Neisseria (a se vedea. Tehnica de colorat, p. 51).
Proprietățile culturale și biochimice. cresterea bacteriilor difterice se produce în condiții aerobe, la temperatura optimă de 37 °.

Fig. 85. Coloniile de bacili difterie pe telluritovoy
mediu.
și - gravis colonii de tip; b - colonii de tip mitis.

Cel mai bun teren propice pentru cultivarea bacteriilor difteriei este pliată cal sau ser bovin. Pe acest mediu, coloniile bacili difteria pot fi detectate prin 8.10.14 ore. Coloniile formă circulară, convexă, oarecum crescute la centru, cu un diametru de 1 mm. Suprafața coloniei este netedă sau ușor granulată, de culoare crem. La periferia coloniei sunt mai transparente decât în ​​centru. Cultura crește pe măsură ce nu fuzioneze cu fiecare alte colonii, care îi conferă o formă ușor nodulară (shagreen).
Tipuri de bacterii difterie. Pe baza proprietăților culturale și biochimice ale celor trei tipuri de tije difterie: gravis, mitis, intermedius. Cu tipul de diferențele asociate agentului patogen în tabloul clinic al bolii. A considerat că stick-uri de tip difterie Gravis apar în cazurile severe, toxice. Ele formează pe mediu telluritovoy (agar cu sânge și telurit de potasiu) serovatochernye relativ mari sau plate colonii negre, aspre cu ischerchennostyo radial și margine zimțată (Fig. 85) pentru bulion da un precipitat granular și film amidon descompus și glicogen, hemoliza nu este cauzata . Bastoane de tip mitis observat în cazurile în care frecvente efecte toxice sunt ușoare, cu toate că filmele amigdalele pot fi destul de mare. Ele formează în coloniile convexe netede-telur agar mici lucioase
negru, cu o margine netedă, se amestecă uniform bulion, amidon și glicogen nu sunt descompuse, gemolitichny. tip intermedius ocupă o poziție intermediară între gravis și mitis. Type bacterii intermedius cresc prost și formează colonie neagră mică plat cu o bordură transparentă pe margine. Miercuri Tyndall (cistină-Telurit - mediu fără ser) bacilli Colony difterie sunt înconjurate de un halou de culoare maro închis. În prezent, cu toate acestea, ea a stabilit că evoluția clinică a bolii depinde adesea de bacilul de tip difterie. Toate tipurile de bacilul difteric descompuse de glucoză, maltoză, galactoză, pentru a forma acidul, nici gazarea. Lactoză, zaharoză, manitol, și ele nu se descompun.
Difteroidele și bacterii lozhnodifteriynye. Intitulat „difteroidele“ coli condițional combinate, difteric morfologic similare, dar care nu au proprietăți toxice. Ele se găsesc pe piele și membranele mucoase ale oamenilor sănătoși. Acest grup include Corynebacterium xeroza, Corynebacterium acnee și colab.
Pe gura membranei mucoase, nas, nazofaringe apare lozhnodifteriynaya coli - Corynebacterium Hoffmani.
dificultăți speciale în diferențierea acestora de la bacilii difterie experimentat microbiolog tehnician nu se simte. De exemplu, bagheta Hoffmann mai scurt și mai gros, nu are nici un polimorfism localizat în perechi sau palisadă nu are nici o volutin cereale. xeroza Corynebacterium, spre deosebire de bacilul difteric are mai multe boabe volutin. Alte difteroidele dimensiune mai mică difterie bacillus, nu au polimorfismul, sunt dispuse una față de alta la un unghi sau palisadă nu are boabe volutin sau un singur bob la un pol al celulei.
În cazurile îndoielnice, este necesar să se recurgă la studiul activității biochimice a culturilor izolate și toxicitatea se.
mediu teluric. 1. hemato-agar teluric. La 100 ml de topit și răcit la 50 ° 2% agar carne-peptonă (pH 7,6) a fost adăugat 5-10% sânge uman sau animal defibrinat și 1 ml de soluție 2% de telurit de potasiu (KgTe04). Mediul este bine amestecate și turnat în ceașcă. In acest mediu, a redus difterie telurit de potasiu pentru a bacteriei telur metalic.
On-Telurit agar cu sânge de bacterii coccal grup cresc lent. colonii Aureus până la sfârșitul 2 zile devin mari gri sau negru, cu o tentă maronie. Colonii Hoffmann Coli până la sfârșitul prima zi de creștere - netede, lipicioasă cu centrul negru și gri, la periferie, în a 2-a zi de întreaga suprafață a coloniei devine negru.

1. Miercuri Clauberg. 100 ml de 3% agar nutritiv (sau 7,5 g de agar nutritiv uscat la 100 ml apă distilată) a fost topită, se adaugă 3 ml dintr-o soluție 2% de telurit de potasiu 10 ml de glicerină și 50 ml dintr-un amestec de sânge lac. Rapid totul se amestecă și se toarnă în ceașcă. Mediu este clar, culoarea vinului roșu.

de sânge lăcuit preparat după cum urmează: la 34 ml apă (sterilă) distilată, se adaugă 16 ml de sânge de bovine defibrinat sau sânge uscat sau instrucțiuni diluate uman respectiv.
Prepararea unui amestec de glicerol: la 40 ml de sânge de bovină defibrinat sau sânge uman sau diluat se adaugă uscat 20 ml de glicerol steril chimic pură. Amestecul a fost recomandat să stea în frigider timp de 3-6 săptămâni. In acest mediu, difteria bacilul, sare de regenerare telur crește în formă de colonii opace rotunde cu un centru de negru sau gri închis. Lozhnodifteriynye bețișoare opace formează colonii mici de gri cu centru maro. Difteroidele cresc sub formă de colonii gri strălucitor convexe, cu un centru de negru.

1. Cistina-Telurit-ser mediu Tyndall (modificat conform instrucțiunilor). La 100 ml de 2% din ° geloză nutritivă topit și răcit la 60 se adaugă succesiv: 1) soluție 1% de cistină în soluție 0,1 N H2S04 (sau CI1) - 12 ml; cistină trebuie să fie dizolvat în acid sulfuric sau clorhidric, încălzirea pe o baie de apă la o temperatură de 80-85 °, 2) 0,1N. Soluție NaOH 12 ml, și 3) soluție telurit 2% potasiu 1,8 ml, 4), soluție hiposulfit de sodiu 2,5%, 1,8 ml, 5) normal de cal sau ser bovin - 20 ml. Mediul este agitat și se toarnă în steril Petri strat de 4-5 ml.
2. Indicatorul hinozolnaya Dry miercuri perpetrarea B (conform instrucțiunilor). La 100 ml de apă rece se adaugă 8,7 g de mediu pulbere hipozolnoy uscată, bine amestecate și încălzite la foc mic până la topirea completă a agar. Mediul se fierbe timp de 2-3 minute, nepermițând stick-agar, pentru a forma krupnopuzyrchatoy spumă sedimentare rapidă.

Diagnosticul microbiologic. În difterie, următoarele tipuri de cercetare de laborator: bacterioscopice, bacteriologice, experimental. Materialul pentru studiu sunt secreții ale membranelor mucoase, filme și epidemiologilor la cerere infectate - lapte, înghețată, spălături de la diverse obiecte Ia un material tampon steril, constând dintr-o bucată de vată, înfășurată pe un capăt al unui băț de lemn sau tijă metalică (jucării, etc.). În prezența filmelor difterice brusc definite ar trebui să frecați zona afectată cu un tampon pentru a obține o anumită cantitate de exudat. Material preluat din nas în același tampon, dar unele număr minim de lână înfășurat pe ea. Pentru a capta materialul, este necesar să se treacă primul tampon pasajul nazal. Atunci când se iau materialul din
NOCA necesare pentru a face nările toaleta (se spală cu soluție salină sau alcool) și nu atingeți pielea nasului.
material prelevată este plasat în eprubete și imediat trimise la laborator. Dacă livrarea durează mai mult de 3-4 ore, folosind tampoane umezite cu o soluție de 5% glicerol în 0,85% soluție salină. Tampoanele trebuie să fie protejate de acțiunea soarelui, congelare și uscare. Cea mai mare parte inoculare (2-50%), difterie bacili de la pacienți difterie este cauzat cel mai adesea prin luarea materialului greșit, iar durata de timp de la momentul luării sale în sus de însămânțare.
In laborator, se procedează la examenul bacteriologic. Tampoanele sunt introduse în tubul din ser de cal pliat și apoi prin frecarea suprafeței conținutului în ser, în timp ce produce mișcarea de rotație. În același timp, face cultură pe o ceașcă de agar cu sânge telluritovym, miercuri sau miercuri Clauberg Tinsdalya pentru a obține culturi pure de bacili difteria. Pentru scopuri de diagnostic, conținutul de studiu microscopic direct pe tamponul se desfășoară în prezent o rară, dar, uneori, în cazuri de urgență, la solicitarea unui medic care aplică acest lucru este justificat. Apoi, după ce materialul de plantare face frotiuri pentru colorarea albastră și Neisseria.
Material însămânțat crescute la 37 ° C și se examinează 18-24 ore mai târziu. Acesta poate fi folosit pentru a efectua un studiu, de exemplu, 6-12 ore în caz de urgență. A crescut de cultură preparate frotiurilor și colorate Gram, metilen alcalină albastru și Neisser și mikroskopiruyut. Uneori a întârziat dezvoltarea microbilor. În aceste cazuri, este necesar să părăsească cultura pentru o altă zi, si repeta examenul microscopic. Prezența microorganismelor cu difterie morfologice caracteristice și proprietățile tinctoriale, pot fi considerate ca un rezultat pozitiv.
O metodă care permite selectarea difterie bacillus mai rapid este că tamponul preumezite ser steril, care se rostogolesc pe tamponul prin încălzire la 80 °. tampon Ser sters zona afectata (faringe, amigdale) și plasate într-un termostat la 37 °.

bacilii Proprietăți difterie și aproape de ea difteroizi