Diagnosticul de laborator al tuberculozei și micobacterioza - studopediya

Pulmonara si tuberculoza extrapulmonară cauzate de bacterii complex MTS (Mycobacterium complex tuberculoza), precum și non-tuberculoase complex micobacterii (complex M.avium, M.kansassii) MAC. complexului Mycobacterium MAC a lovit adesea oamenii cu imunodeficiențe de diverse etiologii (în special SIDA). Metode pentru diagnosticul microbiologic al tuberculozei este prezentat în Schema 15.

Diagnosticul 15.Mikrobiologicheskaya de conducere al tuberculozei

Bioprobana cobai sau iepuri.

diagnostic molecular. PCR pentru detectarea fragmentelor de ADN specifice MTS Mycobacterium complex (M. tuberculosis, M.bovis / BCG, M.africanum) în materialul pacientului și diferențială ferentsirovki din nontuberculous mycobacterium tuberculosis (complex MAC - M. avium, M. kansassii).

Materialul pentru studiu este spută, spălările bronsic, fluid gastric bronhoalveolar, exudat pleural, sânge, urină, fecale, lichid sinovial, biopsii din diferite țesuturi.

procesarea inițială a materialului este tratat pentru a decontamina prezența microflorei străine și lichefierea și flotație omogenizare spută, fluid bronhoalveolar, etc. La acest material a fost tratat cu mucolitice (N-acetil- # 946; cisteină) și substanțe antibacteriene (1-2% NaOH), se centrifughează 20 min la 3000 g și supernatantul este îndepărtat. Peletul a fost resuspendat într-o cantitate mică de IR.

Metoda microscopica presupune examinarea microscopică a materialului de test frotiu metode vopsite-spe-triviale pentru a identifica acid-

bacterii rezistente, care permite o concluzie tentativă. Un examen microscopic rezultat negativ nu constituie un motiv de îndepărtare a diagnosticului „tuberculoza“. În prezent, principala metodă pentru detectarea Mycobacterium este luminiscență

Preparate procent de microscopie colorate cu auramină o concentrație de 1: 1000 timp de 15 minute, urmată de albire de acid clorhidric 3%, într-un alcool timp de 30 de secunde, spalat si tampon contracolorate timp de 1 minut cu o soluție apoasă de rodamină 6G într-o concentrație de 1: 5000. Micobacteriilor au o strălucire galben strălucitor pe un fundal întunecat. se utilizează metoda Ziehl-Nielsen mai puțin frecvent (Fig. 20). Tipic Ziehl-Neelsen colorată frotiurile din culturi pure. Metoda Microscopia de restricție este că nu permite să se diferențieze între micobacteriilor și un alt acid-fast-mikroor-organisme.

Fig. 20. tubercul bacillus (Mycobacterium tuberculosis) la pacientul sputa. Colorare Ziehl-Nielsen. Ruby stick-uri de culoare roșie (sau a unui grup), pe un fond albastru. x 900

Metoda bacteriologice este principalul diagnostic meto-casa de tuberculoză, având o sensibilitate și specificitate mare.

Pentru cultivarea micobacteriilor ca metoda de microcultură Pret. În acest scop, mai multe înguste pre-bations ochelari fac frotiuri groase, uscate,-obrabaty vayut câteva minute 2-6% acid sulfuric, apoi neutralizate. de sticlă a fost apoi imersat în tuburi citrată de sânge hemolizat cu o diluție de 1: 4-1: 8, și a pus într-un termostat. 7-14 zile de sticlă este îndepărtat, de înregistrare a medicației, rugozitatea de stejar Ziehl-Nielsen și mikroskopiruyut. tulpini virulente de micobacterii, caracteristicile rizuyutsya în creștere ca meșe sau panglica prin formarea factorului cordon.

Fig. 21. Coloniile de bacili tuberculosi în mediul Lowenstein-Jensen

Identificarea culturii izolate micobacteriilor la nivelul speciei se realizează prin schema convențională pe baza studiului de morfologie tipice proprietăților culturale caracteristice (la temperatura optimă, pigmentooobrazovaniyu rata de creștere în întuneric și lumină) activitatea, biochimice (prezența nitrat reductaza, catalaza, pirazinamidazy ureazei, produse de acid nicotinic - niacina proba recuperare fire Ratov și telurit de potasiu, hidroliza Tween-80) și folosind moleculare genetice (hibridizare ADN) și Meth chimice rânduri, ceea ce reduce timpul pentru diagnosticul de laborator al tuberculozei până la 4-7 zile.

Pentru a determina niacin culturii micobacterii într-un lichid tatelnoy pi mediu a fost adăugat KCN 1 ml soluție și 1 ml dintr-o soluție 5% de clor; reacție pozitivă se caracterizează prin apariția unei culori galben strălucitor. După ce se lasă reacția este neutralizată prin adăugarea rezultatelor KCN în eprubete 3-5 ml de soluție de carbonat de sodiu 10%.

De asemenea, este efectuată pentru a determina sensibilitatea micobacteriilor metodei antimicrobiene a concentrațiilor absolute (cel mai frecvent pe medii nutritive lichide, sau prin metoda de microcultură prin Pryce, luând timp de 3 săptămâni până la 3 luni sau pe LJ mediu solid) cu estimarea rezultatelor pipernicit de creștere sau a activității nitrat reductaza care este important pentru scopul terapiei adecvate. limite de stabilitate tubercul bacillus până la 5 ug streptomicină / ml, PAS - 10 ug / ml, tubazid - 1 ug / ml, cycloserine și etionamidă - 30 ug / ml. Conceput ca PCR pentru a determina sensibilitatea micobacteriilor la medicamente chimioterapice și antibiotice. Alte metode de determinare a rezistenței de droguri M. tuberculosis sunt biologic (LRP -Luciferase-Reporter Phage - luminiscență micobacterii rezistente în prezența bacteriofagii modificate genetic care poartă gena luciferazei) și o molecular genetică bazată pe PCR.

Biotestare Alocarea raneeispolzovalasdlya micobacteriile prin infecție subcutanată de cobai (sensibile la M. tuberculosis) și iepure (sensibil la M.bovis) imagini ale pacientului, urmată de observarea animalelor (până la 4 luni). După această perioadă, sau moartea animalelor a fost realizat organisme microscopice de examinare și bacteriologice, în scopul de a detecta bacililor tuberculoși. În prezent, de bioevaluare în practica reală a etsya rar din cauza pierderii de tulpini rezistente la antibiotice de micobacterii induce o infecție tipică și moartea animalelor.

diagnostic molecular. PCR a fost dezvoltat, care permite detectarea micobacteriene specifice speciei acizilor nucleici MTS complex (M. tuberculosis, M.bovis / BCG, M.africanum) direct in probele clinice de la un pacient si diferential ferentsirovat Mycobacterium tuberculosis din nontuberculous - MAC complex (M. avium, M. kansassii). Metoda PCR este comparabil cu studiul bacteriologic, cu toate acestea, este rapid - în termen de 24 de ore.

La rezultatele pozitive ale metodelor de cercetare de microscopie si diagnostic PCR a tuberculozei este confirmată și a recomandat numirea imediată a medicamentelor anti-TB pentru sistemul convențional. Un rezultat negativ PCR pentru detectarea bacililor acid rapid în frotiurile exclud prezența complexului Mycobacterium tuberculosis MTS, cu toate acestea, în această situație la semnificative agenți antimicrobieni activi împotriva complexului mycobacterii non-tuberculoase MAC. În alte cazuri, este necesar să se aștepte rezultatele studiilor bacteriologice-TION.

Serodiagnosis. Dezvoltat RSK, Phragmites și alte teste serologice pentru determinarea anticorpilor în serul pacienților cu tuberculoză antigene de Mycobacterium tuberculosis, dar valoarea diagnostică a acestor reacții nu sunt.

Allergodiagnostics. Plasat test de alergie (Mantoux) intradermic - ochi-gap a fracțiunii de proteină obținută din filtrat prin încălzirea bulionul de cultură a ucis M. termen de tuberculoză. reacție de contabilitate se efectuează 24-48 ore. Eșantionul este utilizat pentru a estima fluxul procesului tuberculos, determinarea eficienței unei națiuni-vaktsi și selectarea persoanelor pentru revaccinarea împotriva tuberculină kuleza.