Diagnostic: leucemie bovine - Reed

leucemie bovină - boală infecțioasă cronică cauzată de un virus de leucemie bovine (VLKRS). Leucemia bovine bolnave de toate vârstele. Clinic, boala apare mai frecvent la animale cu vârsta de peste 4 ani.

Boala este inițial asimptomatică, apoi a dezvoltat o limfocitoză persistentă sau formarea de creșteri tumorale la fel ca în hematopoietic și alte țesuturi și organe.

Agentul cauzal al leucemiei bovine este virus ARN oncogen din familia Retroviridae.

sursa patogen - animale VLKRS infectate.

Factorii de transfer sunt de sânge, lapte și alte secrete și excrețiile conținând celule limfoide infectate VLKRS.

Infectia poate aparea, de asemenea, atunci când partajarea conținutului VLKRS animale infectate și sănătoase.

Baza diagnosticului leucemiei bovine este metoda serologică de cercetare - reacție difuzie precipitare (PDR), altfel cunoscut reacția de imunodifuzie în gel de agar (RID).

Printre pozitive reacționează la animale RID (VLKRS infectate) folosind metoda hematologic identifica pacientii cu leucemie.

Reacția de imunodifuzie (RID). Metoda se bazează pe detectarea ser a anticorpilor precipitanți-animal specific antigenii virusului leucemiei bovine. Anticorpii specifici apar în sânge în 2-8 săptămâni după infectare și animale VLKRS stocate în organism pe tot parcursul vieții.

Probele de sânge au fost luate pentru cercetare nu mai devreme de 30 de zile după administrarea vaccinurilor și alergeni de animale la animalele gestante - cu cel puțin 30 de zile înainte de fătare sau 30 de zile după aceasta.

Obținerea ser. Serurile au fost pregătite pentru investigarea sângelui animal testat într-o cantitate de 3,2 ml, și trimis la laborator cu documentul de însoțire care să indice numărul economie titlu (pseudonim), vârsta, sexul, rasa animalului.

Sânge (pentru ser), luate în eprubete bacteriologice, incubate timp de 1-2 ore într-un loc cald (nu mai mare de 40 ° C). Pentru o mai bună separare a serului înconjoare cheag in proflombirovannoy vitro după fiecare probă de sârmă. Tuburile au fost incubate timp de 20-24 ore la temperatura de 4-10 ° C, Când incapacitatea de a studia rapid ser preparată este depozitată în stare congelată.

Pentru RIM utilizare formulare kit pentru diagnosticul serologic al leucemiei bovine, care cuprinde: virusul antigen leucemie diluant antigen din ser bovin uscat specific precipitant specific (PCA) la agarul amestec de sare virusul leucemiei (PAS) și PAS diluante controlul seruri: negativ, pozitiv, pozitiv și slab pozitiv cu anticorpi la p-24 antigen VLKRS.

Aparatură și reactivi:

• Petri de 100 mm diametru;

• Standard timbru-pumn pentru a preveni găuri în agar;

• dozatoare cu sfaturi de unică folosință;

• clorură de sodiu (puritate de reactiv);

Declarația de RID. Prepararea componentelor de reacție la lucrările efectuate în conformitate cu „Instrucțiunile pentru utilizarea kit-ul pentru diagnosticul serologic al leucemiei bovine.“ Antigenul a fost dizolvat în 5 cm3 diluant. Antigenul dizolvat a fost depozitat la 4 ° C timp de până la două săptămâni.

Diluant amestec PAS agar și sare a fost transferat într-un balon și a fost turnat în apă distilată până la un volum de 200 cm3 și apoi balonul a fost plasat într-o baie de apă și se menține până la topirea completă a granulelor de agar. Molten gel de agar având o temperatură de 50-70 ° C, turnat strat de 2-3 mm (12-15 ml), în vase Petri degresate și se lasă să le întredeschis la temperatura camerei, timp de 1 h. După solidificare agar special matriță poanson pentru a face găuri gel, prevenind formarea de fisuri între ele și dezlipiri de pe fundul plăcilor cu agar. In fiecare cupă face 5 cifre, fiecare fiind format din 7 găuri: una în centru, restul periferie.

Antigen, controlul și seruri de testare adăugate în godeurile fiecare pulverizator figura cu vârfuri de unică folosință.

Antigen (A) introdus în gaura centrală, două găuri diametral opuse umplute cu ser de control (CS). Figura 4 rămase în godeurile periferice (1,2, 3,4) sunt umplute cu seruri de testare. Alveolele sunt umplute la partea de sus, evitând fluid transfuzie peste margine. După umplerea toate godeurile vasele petri au fost astupate și pus într-un cuptor la T = 20 timp de 48 de ore.

Contabilitate și evaluarea rezultatelor de răspuns. Reacția ia în considerare nu mai devreme de 48 de ore și nu mai târziu de 96 de ore.

Cupele sunt navigarea pe un fundal întunecat, direcționarea unui fascicul focalizat de iluminatorului la fundul paharului la un unghi de 30-45 °. Reacția este evaluată numai dacă se formează gelul de agar între linia de precipitare clară gaură. În cazul în care este absent sau slab dezvoltat, reacția trebuie repetată.

O linie de precipitare specifică, formată prin precipitarea serului de control și antigenul trebuie să fie clar, să ia forma unei linii drepte, echidistant față de godeurile cu antigen și ser de testat.

este format considerată linie de precipitare nespecifice între godeurile cu serul de testat și antigenul, dar nu fuzionează cu linia de control de precipitare și se intersectează ea, sau se mărginește, formând un colț.

În funcție de prezența anticorpilor specifici împotriva antigenelor în testul VLKRS serice de reacție evaluate ca fiind pozitive sau negative.

Luați în considerare reacția pozitivă dacă între godeurile cu antigen și ser de test banda de precipitare este format, care este conectat cu banda ser de control de precipitare, formând o linie continuă, care este identică cu ea.

• dacă linia dintre godeurile cu precipitare serul de testat și antigenul este absent, dar linia de control al precipitării zerului forme lângă sondele cu cot linia de testare îndreptată spre godeurile antigenului - ser slab pozitiv;

• în cazul în care linia de comandă este scurtat semnificativ de godeurile cu serul de testat și are o îndoire difuză gaura cu antigenul sau formează o linie de precipitare situată foarte aproape de bine cu antigenul - ser puternic pozitiv.

Pozitiv reacția dintre ser poate forma o a doua linie de precipitare care este situată mai aproape de gaura cu serul de test. Această linie indică prezența anticorpilor precipitant în ser față de un al doilea antigen (p24) VLKRS.

În formarea unei gros, scurt, fără linie de precipitare de control coturile nu atinge godeurile cu rastitrovku ser de testare necesară pentru a efectua acest ser de testat cu ser fiziologic pentru a obține un rezultat care poate fi evaluată ca un negativ, pozitiv sau nespecifică. Acest lucru necesită ser fiziologic într-un volum de 100-500 pour ul în tuburi sau puțuri în plăci de plastic standard pentru stabilirea testelor serologice (număr de tuburi sau fântâni corespunde numărului diluția necesară). Tubul de testare primul sau bine cu ser fiziologic pentru a face același volum de ser, se amestecă și se transferă aceeași pipetării în același volum la următoarea sondă sau în flacon, apoi, după agitare - la următorul și așa mai departe

Ca rezultat, în tubul primul test sau bine sub ser de testat diluat în 2 ori, în al doilea - de 4 ori, în al treilea - 8 ori, etc.

Reacția a fost considerată negativă dacă linia de control se extinde la godeurile cu serul de testat fără îndoire.

În cazul în care linia de precipitare este rea sau există o zonă opalescent vizibilă în jurul sondelor, reacția trebuie rearanjate.

Linia de comandă a schimbării în precipitare direcția sondelor cu antigenul sau cu ser de control indică o perturbare a antigenului și a raportului de anticorpi în sistemul de testare. În acest caz, ar trebui să fie utilizat o altă serie de kit de diagnosticare.

seruri de sânge de animale au fost testate pozitiv în virusul leucemiei RID recunosc infectate și trebuie să exploreze metode de hematologie.

Stadializarea Scheme și imunodifuzia evaluare în gel de agar (RID)

1- ser reacționează în mod negativ, serul reacționează pozitiv 2-, 3- reacționează ser slab pozitiv 4- ser pozitiv reacționează cu a doua linie de precipitare, 5- reacționează brusc pozitiv seric 6- reacționează pozitiv cu linia ser nespecifică de precipitare, ser reacționează negativ 7- o linie de precipitare nespecific, 8- reacționează negativ la ser cu zona opalescent un oncornavirus antigen la bovine, ser de control KS împotriva antigenului glicoproteină bovine nkornavirusa.