Caracterizarea imunohistochimica a celulelor tumorale

Opinia expertului - MD, profesor de Anatomie Patologica Facultatea de Medicina Universitatea de Medicina MV Samoilov

Manualul este realizat în cadrul programului educațional inovator al Universității Prieteniei Populare Române, direcția de „complexe orientate spre export, a programelor educaționale de inovare pe direcțiile prioritare ale științei și tehnologiei“

PROBLEME PRACTICE oncomorphology

Numărul Subiect 10. Caracterizarea imunohistochimica a celulelor tumorale. Tumorii epiteliale

In prezent, metoda imunohistochimică de cercetare este utilizat pe scara larga pentru detectarea tumorii primare necunoscute în prezența metastazelor sale. De la 10 la 15% din metastazele cancerului sunt caracterizate prin aceea diferite organe, carii si ganglionii limfatici.

Frecvența cazurilor când boala este însoțită de dezvoltarea metastazelor, și localizarea tumorilor primare la momentul studiului morfologic nu este cunoscut, este de 3-15% din toate cazurile de cancer. Astfel, localizarea camerei primare este determinată de o durată medie de 30-40% dintre pacienți, la autopsie - 60-70%.

Studiu imunohistochimic în funcție de tipul morfologic neoplasmului ajută la clarificarea histogeneză a tumorii și / sau un comentariu privind localizarea probabilă a tumorii primare. Cele mai multe dintre aceste tumori sunt adenocarcinoamelor de sân, colon, plămân, ovarian, pancreatic, de prostată și de stomac.

În cazul adenocarcinom metastatic studiu sarcina imunohistochimice este de a identifica sursa probabila de metastaze.

În acest scop, este utilizat în prezent un număr de markeri, inclusiv cytokeratins 7 și 20, factor de transcripție tiroidian (TET-1), CA125, CDX2, receptorii de estrogen, GCDFP-15, lizozima, mezotelin, antigen specific prostatic.

Cytokeratin 7 (CK7) se referă la o familie de proteine cu filament intermediar, are o greutate moleculară de 54 kDa este detectată în diferite tipuri de epiteliu glandular. Anticorp clona OV-TL (Dako) colorează citoplasmatici diferite tipuri de celule epiteliale glandulare normale și neoplazice, inclusiv epiteliului ductal. CK7 este detectată în celulele cilindrice și epiteliului glandular al plămânilor, cervical, de sân, tractului biliar și conductele colectoare ale rinichilor. CK7 colorează epiteliului de tranziție a epiteliului vezicii urinare a ovarelor și a plămânilor. Uneori puteți găsi colorarea pozitivă a endoteliului vascular. La rândul său, CK7 nu este exprimat în celulele epiteliale ale tractului gastro-intestinal, de prostată. Practic CK7 nu a fost detectat în hepatocite, proximale epitelial si tubusoare contort distal de rinichi, celule mioepiteliale, epiteliu multistratificat al pielii, limbii, esofag și ectocervix. Anticorpii monoclonali OV-TL identifica anumite tipuri de adenocarcinoame și pot fi folosite pentru diagnosticul diferențial între țesuturile-CK7 pozitive (cum ar fi cancerul ovarian si cancerul perehodnokletochny) și țesuturi CK7-negative (cum ar fi adenocarcinom al tractului gastro-intestinal și cancerul de prostată).

Cytokeratin 20 (CK20) este reprezentativ tip I keratina, care este exprimat direct în epiteliul stomacului și intestinului subțire, uroteliu și celule Merkel a pielii. Anticorp (clona Ks 20,8, Dako) reacționează cu greutatea moleculară corespunzătoare de proteină de 46 kDa. CK 20 - este principala proteină a enterocitelor mature și celule caliciforme; este exprimat în mod specific în celulele epiteliale ale mucoasei gastrice și intestinul subțire. Acesta poate fi, de asemenea, identificate în adenocarcinoamele de colon, de stomac, pancreas, capilarele biliare in tumorile ovariene mucinoase, cancerul de vezica urinara perehodnokletochnom si cancer al celulei Merkel. La rândul său, în cancerele scuamoase, adenocarcinoame de sân, plămân, endometrial, tumori ovariene nu mucinoase si carcinom pulmonar cu celule mici CK 20 nu este exprimat.

TET-1 - factor de transcripție nucleară, care este NKX2 familia de proteine homeodomeniu (greutate moleculară de 40 kDa); exprimate țesuturi embrionare și adulte de plămân și tiroidiene. Nucleele cele mai multe celule ale altor organe - ficat, stomac, pancreas, intestin subțire și colon, rinichi, sân, piele, testiculelor, hipofiza, prostata si factorul activ suprarenală nu este conținut. a fost detectat TET-1 în adenocarcinoamele pulmonare primare și nu este exprimat în adenocarcinoamele de cancer de colon și de sân. Anticorpii la TTF-1 sunt un marker valoros pentru diagnosticul diferențial al adenocarcinom al metastazelor pulmonare de cancer de san, si mezoteliom. În identificarea adenocarcinoamele pulmonare prin colorația TET-1 este mai specific decât folosind anticorpi antisurfaktantnyh.

Lizozimul catalizează hidroliza anumitor mucopolizaharide ale bacteriilor membranei celulare. Folosit pentru a identifica tumori de histiocite și serii de celule mieloide leucemice. Acesta a fost detectat în celule de splină, plămâni, rinichi, leucocite sanguine, celule plasmatice, salivă, lapte și fluid lacrimal.

Mezotelin - glicoproteine celulare (greutate moleculară de 40 kDa), este situată pe suprafața celulelor mezoteliale și este asociat cu mecanismele de adeziune celulară. De asemenea, el a dezvăluit în mezoteliom, cancer ovarian epiteliale si unele tipuri de cancer scuamoase. Clone 5B2 (Novocastra) mezoteliom pete epitelioida și adenocarcinom pulmonar, ovar, cancer peritoneal, endometrial, pancreatic, gastric si de colon. Anticorpii nu au reacționat cu renal țesut, ficat, placentă, piele si tiroida. Mezotelina mult în celulele mezoteliale comune, care sunt formate din mezoteliom malign și chistadenocarcinomul ovarian. Acești anticorpi, împreună cu anti-calretinin pot fi utilizate pentru a identifica Mezotelioamele.

CDX2 - proteină recombinantă procariote corespunzând amino porțiunii N-terminală de acid a persoanei CDX2 moleculei. Acesta este un factor specific de transcriere a celulelor mici intestin. gena CDX2 codifică factorul de transcripție-intestinal specific, proteina este exprimată în stadii incipiente de dezvoltare a intestinului subțire și poate face o diferență în reglarea proliferării și diferențierii celulelor epiteliale ale intestinului subțire. Acesta joacă un rol important în inițierea diferențierii celulelor în enterocitelor mature. Clone AMT28 (Novocastra) reacționează cu proteina 40kDa, situată în nucleele celulelor. Este exprimat în nucleele celulelor epiteliale ale intestinului de la duoden la rect. proteina CDX2 este exprimat in tumorile primare si metastatice ale colonului, precum revelat de metaplazia intestinală și cancer gastric de tip intestinal gastric, la rândul său, acesta nu se găsește în celulele epiteliale normale ale stomacului. Această proteină se găsește doar în nuclee de celule epiteliale columnare și adenocarcinoamele colorectale canceroase, astfel poate fi folosit pentru a identifica metastaze de cancer de colon.

CA125 - proteină antigen cancer ovarian. anticorp monoclonal (clona Ov185: 1, Novocastra) recunoaște o glicoproteină cu greutatea moleculară mucinei de aproximativ 200 kDa. Anticorpii au fost colorate diferite tumori, cum ar fi adenocarcinomul de colon, adenocarcinom mamar, tumora uterin, cancer bronho-alveolar, endometrial și adenocarcinom seros ovarian.

ER - receptorii de estrogen. 6F11 Clone (Novocastra) interactioneaza cu alfa receptorilor de estrogen. Anticorpii au fost colorate nuclee cu receptorii de estrogen din epiteliale uterin si a celulelor musculare netede și nucleele epiteliale ale glandei mamare. Identificarea receptorilor pentru hormonii steroizi sunt larg utilizate în tratamentul tumorilor dependente de hormoni. Prezența receptorilor de estrogen este un marker pentru cancerul de san, iar prognosticul poate fi un indiciu al bolii si eficacitatea terapiei endocrine.

antigenului specific prostatic (PSA) - este o glicoproteină. Clona ER-PR8 (Dako) obținută la o greutate moleculară de proteină de 35 kDa. imunohistochimie PSA și biochimică diferit de alți markeri de cancer de prostata larg utilizat - fosfataza acidă prostatică. Acesta este situat în citoplasmă acinare și epiteliului ductal țesutul normal este detectat în hiperplazia benignă de prostată și adenocarcinom. Acești anticorpi pot fi utilizate pentru a detecta cancerul de prostata metastazat, ca standuri PSA celulele tumorale de prostata si determinate în plasma pacienților cu cancer de prostata.

GCDFP-15 - proteină. care apare în mastite chistică difuză, care se caracterizează prin macro și microcysts, ductal și hiperplazie lobulară și altele. mamare patologie. Chisturile formate prin secreție apocrină de către celulele epiteliale. fluid chist conține glicoproteine, incluzând un monomer unic de 15 kDa. În țesutul normal ca și proteina se gaseste in epiteliul glandelor lacrimale, sublinguale și salivare minore, în celulele membranelor seroase, trahee și glandele bronșice.

GCDFP-15 si PSA exprimate simultan in tumorile mamare pozitive pentru receptorii androgeni. Acest marcaj poate fi folosit pentru a identifica adenocarcinom de sân, cancerul ductal ale glandelor salivare și a epiteliului apocrine.

Markerii piesa, cum ar fi PSA pentru cancerul de prostata, TET-1 pentru cancerul pulmonar, munca monospecifici. O altă parte a acestui panou de markeri caracteristice pentru mai multe tumori, Astfel, receptorii de estrogen poate fi detectat in cancerul de san sau cancer ovarian, CDX2 - cu tumori ale tractului gastro-intestinal. Markerii Partea poate caracteriza numai complexul metastaza sursa: receptorii de estrogen, și mezotelin caracterizează CA125 tumori ovariene.

Atunci când carcinom metastatic cu celule scuamoase al studiului imunohistochimice este imposibil, deoarece posibilitățile metodei nu permite să se specifice sursa probabila de metastaze. Acest lucru se aplică metastaza cancerului neuroendocrine diferențiate slab. Cu toate acestea, metastaze neuroendocrine bine diferențiate de cancer (sinonim - carcinoide atipice) coexprimare de CK7 și TTF1 poate indica o localizare a tumorii primare in plamani, iar coexpresia CK20 și CDX2 - în tractul digestiv.

La pacienții cu boala metastatica fara semne morfologice clare ale glandulară (adenogennoy), neuroendocrine și diferențiere scuamoasă, sarcina principală metode suplimentare de cercetare este de a clarifica histogeneză tumorii (mai precis, pentru a stabili direcția de diferențiere a celulelor tumorale). În acest scop, se utilizează următorul panou de anticorpi: p63, CK5, CK14 sau CK5 / CK6, CK18, SD56 (N-CAM).

Anticorpii la proteina p63 (clona 4A4, Dako). proteina P63 p53 aparține familiei de gene supresoare tumorale, care includ, de asemenea, P73 proteine. Aceste proteine reglează procesele celulare ale proceselor de transcripție și lansarea apoptozei ca răspuns la deteriorarea ADN-ului si dezvoltarea hipoxie. P63 este exprimat în nucleele celulelor bazale ale epiteliului de diferite tipuri. proteina P63 detectată în celulele proliferative ale epiteliului cervical, uroteliu și prostată. De asemenea, este exprimata in forme de cancer scuamoase cel mai slab diferențiate. anticorpi P63 pentru a ajuta la diferentierea tumorilor benigne și maligne ale prostatei.

Anticorpi la CD56 proteină (MOS-1 clona, Dako). CD56 este un antigen proteic al celulelor killer naturale. Reacționează cu CD4 + și CD8 +, celulele T în sângele periferic. CD56 poate fi detectat in neuroblastom si cancerul pulmonar cu celule mici, precum si alte tumori.

Citokeratinele CK5 / CK6 (clona D6 / 16 B4, Dako). Citokeratinele sunt o familie de filamente intermediare și găsite în aproape toate celulele. Tipurile cytokeratins CK5 / CK6 detectate în celulele mezoteliale și nu se găsesc în adenocarcinoame. CK5 / CK6 utilizate ca markeri mezoteliom și cancer pulmonar cu celule scuamoase, boala Bowen (specii de carcinom care ataca celulele scuamoase cutanate ale epidermei, dar nu se extinde la straturile bazale). Ele nu se găsesc în adenocarcinoamele pulmonare, dar colorate cu celule mezoteliom și bazale ale glandei prostatei. Acești anticorpi nu reacționează cu țesuturile mezodermala, cum ar fi mușchi și țesutul conjunctiv. Citokeratinele CK5 / CK6 exprimate în adenocarcinoamele slab diferențiate și identificate în mezoteliom epithelioid.

Cytokeratin CK14 (clona LL002, BioGenex), greutate moleculară de 50 kD - este acidă primul tip cytokeratin, prin care este posibil să se distingă epiteliul scuamos stratificat din epiteliul simplu. Cytokeratin CK14 uniform exprimată în citoplasmă tuturor celulelor epiteliului stratificat keratinizing scuamoase. Anticorpii monoclonali pentru a ajuta la diferentierea Cytokeratin CK14 tipurile de celule la nivelul glandei mamare în timpul dezvoltării adenocarcinom.

Cytokeratin CK18 (clona DC10, Dako) - o proteină cu o greutate moleculară de 45 kDa. Anticorpii reacționează cu cel mai simplu epiteliu, incluzând epiteliul conductele și glandele acini. Această proteină este exprimată în epiteliul tiroidei, sânului, tractul gastrointestinal și sistemul respirator. Anticorpii utilizați pentru detectarea adenocarcinoamelor pulmonare, și au fost colorate citoplasmei celulelor tumorale ale celulelor tumorale colorate epiteliale și non-epiteliale (gliom, melanom, osteosarcom).

Pentru diagnosticul diferențial al tumorilor de grad inalt este utilizat următorul algoritm:

CK18 (+) - adenocarcinom;
SK5 / 14 (+) și p63 (+) - carcinom cu celule scuamoase;
SK5 / CK14 (+), CK18 (+) p63 (+) - cancer perehodnokletochny, carcinom cu celule scuamoase, timom;
CK18 (+), CD56 (+) - cancer neuroendocrine.
În expresia de identificare SK5 / 14, CK18 si perehodnokletochny p63 diferentiate cancer cu celule scuamoase, în unele cazuri, eventual, prin examinarea coexpression SK7 și SK20, care este observată la aproximativ 60% din perehodnokletochnogo cancer metastaze.